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          官网
          400-618-1976
          18028014347

           

          一、分析方案

          基于Aglient 7890A/5975C气质联用分析平台,已成功开发出了可靠的分析方法,能同时提供7种SCFA的定性和绝对定量分析,其中包括乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、已酸。至今,我公司已合作了几十例SCFAs靶向代谢组学分析项目,积累了丰富的检测分析经验。
          1.1 方法建立
          标准溶液--预处理--线性--精密度检测限

          1.2 样本分析
          样本--提取及预处理--检测--定性定量分析


          二、方法及步骤简述

          1、样品提取

               称取适量样品,加入4mL的甲醇/CH2Cl2(1:3)混合溶液,摇匀;恒温在30℃以下超声抽提10min。取出离心管,放于离心机中离心(1800rpm,10min),收集上清液,重复3次;将萃取液在柔和氮气流下吹干。

          2、萃取液的皂化

               加入3mL 6%KOH的甲醇溶液(配制:6gKOH/甲醇118mL左右),超声10min,放置30min,重复3次,室温放置过夜(瓶盖盖紧)进行碱水解;加入2mL正己烷,超声10min,摇匀,震荡离心,弃除上层正己烷萃取液,重复3次。在上述萃取完剩下的溶液中(水相),加入约1mL 4N的HCl使pH<2,再用2mL正己烷萃取3次。

          3、脂肪酸的衍生化

               将上述萃取液,转移到带盖玻璃管中,用氮气吹干后,加入约2mL BF3-MeOH,玻璃管上空间冲入氮气后盖盖密闭,于90℃下加热2h;待样品冷却后,加入5%NaCl溶液约1ml,用2ml正己烷萃取3次,并将萃取液转移到2mL进样瓶中,氮气吹干,待分析。

          4、色谱条件

          色谱柱:Thermo  TG-5MS 30m x 0.25mm x 0.25µm

          升温程序:80度起始温度,保持1分钟;10度/min升温到200度,5度/min升温到225度,2度/min升温到250度,保持5min。

          MS,EI源,

          分流模式:不分流

          scan模式

          传输线温度:280℃ 离子源温度:280℃ 进样口温度:290℃ 氦气,恒流模式,流速:1 .2mL/min。 扫描范围:30-400 进样量:1μL。 检出限:0.02mg/kg


          三、案例解析

          该研究对大鼠粪便6种SCFA进行了定性定量分析,从结果可以看出,6种SCFA在8 min内同时被检测,分离度及峰型良好,通过对线性、精密度、定量限等参数的考察,得出本次实验方法满足分析要求,结果可靠。


           

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